メタロアッセイ低濃度銅測定 LS (尿中銅定量キット)

低濃度銅 LS

メタロアッセイ銅測定LSは、生物試料(血清・血漿・尿など)中の銅(Cu²⁺,Cu⁺)をマイクロプレートリーダー(96穴ウェル)で迅速に定量することができます。
本アッセイ原理は免疫抗体法ではなく、キレート定量法であるため、検体の生物種に依存しません。
尿を検体とする場合は前処理不要です。
キット同梱の標準試料とブランク試料の２点により校正するため、多点校正は不要です。
毒劇物を含んでいないため、取扱、廃棄時の安全性に優れています。

名称
低濃度銅測定
(尿中銅)

製品コード
CU20M
CU21M

測定対象
Cu²⁺
Cu⁺

対象サンプル
尿，唾液，細胞ライセート，組織抽出液など

測定波長
（極大波長）
570 ～ 590 nm (582 nm)

測定範囲
2 ～ 80 μg/dL

マニュアル

MSDS

測定回数
（1キット）
100回
200回

価格/円（税別）
49,800
79,800

測定意義

銅を含むタンパク質の主な役割は酸化還元機能です。現在知られている、銅を含む酵素の殆どが分子状酸素と直接反応します。
プラズマ中の銅のおよそ95％はα-2-グロブリン、セルロプラスミン、フェロキシダーゼ活性を持つ酸化酵素と結合しています。
銅の欠乏に関連する病気として、心臓疾患、骨粗しょう症、骨関節炎、Menkes症候群、ウイルソン病などがあります。
また、生体内の抗酸化機能の低下についても報告されています。一方、過剰の銅は有毒となります。

測定原理

本法は3-5 DiBr-PAESAと銅とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し銅濃度を求めます。

セルロプラスミン、及びタンパク質に結合した銅を、弱酸、変性剤により解離させ、銅-3-5 DiBr-PAESA錯体を形成させます。
この銅キレート錯体を波長582nmで測定することにより銅濃度を求めることができます。

原理図CU03M_101

測定方法(サンプル前処理)

前処理プロトコル

◯本キットでダイレクトに定量可能な試料

e.g.)尿

キット中の変性剤が銅をタンパクから解離させ、還元剤によって還元したのち発色させます。特に前処理は必要ありません。

＊蓄尿をサンプルとする場合は、塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2~3になるよう調整してください。
◯酸抽出の必要な試料

e.g.)細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料

サンプルを低pHにすることでタンパクから銅を解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。
- 遊離銅
- タンパク結合（配位）銅（ Protein-Cu2+ 、 e.g.アルブミン、メタロチオネイン）
- その他、配位結合性銅
＊EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。

＊有機銅やヘム銅などは酸分解を行って下さい。
◯マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料

e.g.)EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機銅（　-C-Cu-C- 単結合の場合）、環状配位子内包銅（Cu-ポルフィリン等）を測定したい試料

酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力な銅キレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。

（各分解法に基づいて有機物を分解した後、pH2~3に調整し、定容したのちにアッセイ検体としてください。）