メタロジェニクス株式会社

メタロアッセイ 低濃度銅測定 LS (尿中銅定量キット)

メタロアッセイ 低濃度銅測定 LS (尿中銅定量キット)

低濃度銅 LS

  • メタロアッセイ 銅 測定LSは、生物試料(血清・血漿・尿など)中の銅(Cu2+,Cu+)をマイクロプレートリーダー(96穴ウェル)で迅速に定量することができます。
  • 本アッセイ原理は免疫抗体法ではなく、キレート定量法であるため、検体の生物種に依存しません。
  • 尿を検体とする場合は前処理不要です。
  • キット同梱の標準試料とブランク試料の2点により校正するため、多点校正は不要です。
  • 毒劇物を含んでいないため、取扱、廃棄時の安全性に優れています。

  • 名称
  • 低濃度銅 測定
    (尿中銅)
  • 製品コード
  • CU20M
    CU21M
  • 測定対象
  • Cu2+
    Cu+
  • 対象サンプル
  • 尿,唾液,細胞ライセート,組織抽出液など
  • 測定波長
    (極大波長)
  • 570 ~ 590 nm (582 nm)
  • 測定範囲
  • 2 ~ 80 μg/dL
  • マニュアル
  • マニュアル
  • MSDS
  • MSDS
  • 測定回数
    (1キット)
  • 100回
    200回
  • 価格/円(税別)
  • 49,800
    79,800

測定意義

銅を含むタンパク質の主な役割は酸化還元機能です。現在知られている、銅を含む酵素の殆どが分子状酸素と直接反応します。
プラズマ中の銅のおよそ95%はα-2-グロブリン、セルロプラスミン、フェロキシダーゼ活性を持つ酸化酵素と結合しています。
銅の欠乏に関連する病気として、心臓疾患、骨粗しょう症、骨関節炎、Menkes症候群、ウイルソン病などがあります。
また、生体内の抗酸化機能の低下についても報告されています。一方、過剰の銅は有毒となります。

測定原理

本法は3-5 DiBr-PAESAと銅とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し銅濃度を求めます。

セルロプラスミン、及びタンパク質に結合した銅を、弱酸、変性剤により解離させ、銅-3-5 DiBr-PAESA錯体を形成させます。
この銅キレート錯体を波長582nmで測定することにより銅濃度を求めることができます。

原理図CU03M_101

測定方法(サンプル前処理)

前処理プロトコル

  • ◯本キットでダイレクトに定量可能な試料

    e.g.)尿

    キット中の変性剤が銅をタンパクから解離させ、還元剤によって還元したのち発色させます。特に前処理は必要ありません。

    *蓄尿をサンプルとする場合は、塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2~3になるよう調整してください。

  • ◯酸抽出の必要な試料

    e.g.)細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料

    サンプルを低pHにすることでタンパクから銅を解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。

    • 遊離銅
    • タンパク結合(配位)銅( Protein-Cu2+ 、 e.g.アルブミン、メタロチオネイン)
    • その他、配位結合性銅

    *EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。

    *有機銅やヘム銅などは酸分解を行って下さい。

  • ◯マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料

    e.g.)EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機銅( -C-Cu-C- 単結合の場合)、環状配位子内包銅 (Cu-ポルフィリン等)を測定したい試料

    酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力な銅キレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。

    (各分解法に基づいて有機物を分解した後、pH2~3に調整し、定容したのちにアッセイ検体としてください。)

キット操作方法

  1. (1) DIW、標準液、アッセイ検体 100 μlを96 well plateにアプライ
  2. (2) 発色液 140 μlをwell添加
  3. (3) 室温で10分間インキュベート
  4. (4) 主波長582 nmの吸光度を測定
  5. (5) 以下の計算式より銅濃度を求める
    FE02M計算式

製品仕様

    • 使用目的 :
    • 銅(Cu2+,Cu+)の測定
    • 測定試料 :
    • 尿,唾液,細胞ライセート,組織抽出液など
    • 対応している検出機器:
    • マイクロプレートリーダー、紫外可視分光光度計、比色計
      ※キットに96ウェルプレートやキュベットなどは含まれておりません
    • 測定波長(主波長) :
    • 582 nm
    • 感度のある波長域 :
    • 570 ~ 590 nm
    • アッセイ法 :
    • DiBr-PAESA法
    • 特異性 :
    • 生物種を問いません
    • 反応条件 :
    • 室温(25ºC〜37ºC)10分間
    • 保存温度 :
    • 2 〜 8ºC
    • 有効期限 :
    • 製造後12ヶ月
    • 共存物質の影響 :
    • 100 μg/dLのFe、Znによる測定値への影響は5%以内です。
      ただし、EDTAは影響を与えますので使用しないでください。

実施例

  • 直線性

    血清銅測定例

    図1. 標準試料希釈直線性

  • ICP-OES法との比較

    ブタ肝臓測定例

    図2. ICP-OES法と本キットによる銅濃度測定結果

その他の測定例はこちら

学術情報

本キット使用文献

弊社発表文献

  • 岩渕拓也:技術情報協会(編) 微量金属分析とその前処理技術,p192-200(2015)
  • 岩渕拓也、鈴木裕子:技術情報協会(編) 最先端バイオマーカーを用いた診断薬/診断装置開発と薬事対応(2015)
  • その他の文献リストはこちら

【本キット参考文献(論文記載用)】

  • Abe, A., Yamashita, S., Noma, A., Clin. Chem., 552-554 (1989).
  • Makino T., Kiyonega. Clin. Chem. Acta, 171,19 (1988)