測定意義

　血中コレステロールは、主として低比重リポ蛋白(LDL)と高比重リポ蛋白(HDL)、一部超低比重リポ蛋白(VLDL)中に存在し、総コレステロールの約2/3がエステル型(CE)、1/3が遊離型(FC)です。CEの生成は、血中でレシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ(LCAT)の作用によって行われます。生体内のFCは細胞膜、細胞の微細粒子膜、ミエリン鞘などの構成成分をなしている重要な脂質で、体内における総量は体重の0.2%程度です。

血中のコレステロール濃度は、肝及び腸管におけるコレステロールの生成、吸収、異化や血中リポ蛋白代謝と密接に関係し、その測定は体内脂質代謝異常の指標として重要なものです。

測定原理

本法は酵素法を用いた総コレステロール(Total cholesterol)定量キットです。
血中総コレステロールにはエステル型(CE)、遊離型(FC)が存在します。まず、エステル型のコレステロール(Cholesterin ester)をCholesterol esteraseによって遊離型コレステロールと脂肪酸に分解します。得られた遊離型コレステロールは初めから血中に存在する遊離型コレステロールと共に、Cholesterol oxidaseによって酸化されCholest-4-en-3-oneとH2O2になります。この生成したH2O2により、Peroxidase存在下で4-AAとPhenolを酸化縮合させ、赤色キノン色素を生成します。

この色素を546nmの波長で測定することで、総コレステロールの濃度を求めます。

測定方法(サンプル前処理)

• ◯本キットでダイレクトに定量可能な試料

  e.g.)血清、血漿

  本キットでは、血清・血漿を直接サンプルとして測定に供することが可能です。

  ＊抗凝固剤はEDTA、ヘパリンを使用してください。

キット操作方法

1. (1) 96穴プレートに、精製水（又は生理食塩水）、調整した 総コレステロール標準血清、測定試料を2 μL/ウェル分注する。
2. (2) R-R発色試液を200 μL/ウェル分注し、十分に混合する。
3. (3) 37ºCで10 分間反応させる（又は25ºCで20 分間）。
4. (4) 主波長546 nm（副波長700 nm）の吸光度を測定する。

製品仕様

• • 使用目的 :
  • TC/T-Cho(Total cholesterol) の測定
• • 測定試料 :
  • 血清，血漿
• • 対応している検出機器:
  • マイクロプレートリーダー、紫外可視分光光度計、比色計
    ※キットに96ウェルプレートやキュベットなどは含まれておりません
• • 測定波長(主波長) :
  • 546 nm
• • 感度のある波長域 :
  • 500 ～ 550 nm
• • アッセイ法 :
  • 酵素法
• • 特異性 :
  • 生物種を問いません
• • 反応条件 :
  • 10 分間（37ºC）又は 20分間（25ºC）
• • 保存温度 :
  • 2-8ºC
• • 有効期限 :
  • 製造後12ヶ月
• • 共存物質の影響 :
  • ビリルビンは8 mg/dLまで、溶血はヘモグロビン濃度で450 mg/dLまで影響ありません。