測定意義

銅を含むタンパク質の主な役割は酸化還元機能です。現在知られている、銅を含む酵素の殆どが分子状酸素と直接反応します。
プラズマ中の銅のおよそ95％はα-2-グロブリン、セルロプラスミン、フェロキシダーゼ活性を持つ酸化酵素と結合しています。
銅の欠乏に関連する病気として、心臓疾患、骨粗しょう症、骨関節炎、Menkes症候群、ウイルソン病などがあります。
また、生体内の抗酸化機能の低下についても報告されています。一方、過剰の銅は有毒となります。

測定原理

本法は3-5 DiBr-PAESAと銅とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し銅濃度を求めます。

セルロプラスミン、及びタンパク質に結合した銅を、弱酸、変性剤により解離させ、銅-3-5 DiBr-PAESA錯体を形成させます。
この銅キレート錯体を波長580nmで測定することにより銅濃度を求めることができます。

測定方法(サンプル前処理)

• 
  

  ◯本キットでダイレクトに定量可能な試料

  e.g.)血清、血漿

  キット中の変性剤が銅をタンパクから解離させ、還元剤によって還元したのち発色させます。特に前処理は必要ありません。

  ＊EDTAを含む採血管は測定値に影響を与えるので使用しないでください

• ◯酸抽出の必要な試料

  e.g.)細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料

  サンプルを低pHにすることでタンパクから銅を解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。

  • 遊離銅
  • タンパク結合（配位）銅（ Protein-Cu²⁺ 、 e.g.アルブミン、メタロチオネイン）
  • その他、配位結合性銅

  ＊EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。

  ＊有機銅やヘム銅などは酸分解を行って下さい。

• ◯マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料

  e.g.)EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機銅（　-C-Cu-C- 単結合の場合）、環状配位子内包銅 （Cu-ポルフィリン等）を測定したい試料

  酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力な銅キレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。

  （各分解法に基づいて有機物を分解した後、pH2~3に調整し、定容したのちにアッセイ検体としてください。）

キット操作方法

1. (1) DIW、標準液、アッセイ検体 12 μlを96 well plateにアプライ
2. (2) 発色液 240 μlをwell添加
3. (3) 室温で10分間インキュベート
4. (4) 主波長580 nmの吸光度を測定
5. (5) 以下の計算式より鉄濃度を求める
   

製品仕様

• • 使用目的 :
  • 銅(Cu²⁺,Cu⁺)の測定
• • 測定試料 :
  • 血清，血漿，尿，唾液，細胞ライセート，組織抽出液，植物抽出液，毛髪試料抽出液，食品抽出液，飲料水，環境水，鉱水など
• • 対応している検出機器:
  • マイクロプレートリーダー、紫外可視分光光度計、比色計
    ※キットに96ウェルプレートやキュベットなどは含まれておりません
• • 測定波長(主波長) :
  • 580 nm
• • 感度のある波長域 :
  • 570 ～ 590 nm
• • アッセイ法 :
  • DiBr-PAESA法
• • 特異性 :
  • 生物種を問いません
• • 反応条件 :
  • 室温（25ºC〜37ºC）10分間
• • 保存温度 :
  • 2 〜 8ºC
• • 有効期限 :
  • 製造後12ヶ月
• • 共存物質の影響 :
  • ビリルビン40 mg/dL
    乳び500FTU
    ヘモグロビン 0.1 g/dL
    ただし、EDTAは影響を与えますので使用しないでください。

実施例

• 本キットによる管理血清の測定

  

  図1. 銅濃度が既知である管理血清の測定結果

• 本キットによるブタ肝臓中銅濃度 の測定

  

  図2. ICP-OES法と本キットによるブタ肝臓中銅濃度測定結果

その他の実施例はこちら

学術情報