測定意義

鉄は重要な構成元素として多くの酵素中に含まれています。血中の鉄はすべてトランスフェリンと結合しており、ミオグロビン、ヘモグロビンなど、鉄を必要としているグロビンタンパク質の合成のため、赤芽球や各組織へ輸送されます。酸素を輸送するタンパク質の生成には鉄は不可欠であり、その欠乏は鉄分欠乏性貧血、慢性出血性貧血、感染性の貧血を引き起こします。また、肝炎、肝硬変などでトランスフェリンの増加、高濃度の鉄が観測されます。再生不良性貧血、悪性貧血なども鉄の増加を示します。

測定原理

本法はFerrozineと鉄とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し鉄濃度を求めます。

トランスフェリン等の輸送タンパク質に結合している鉄を、試薬中の弱酸、変性剤により解離させ、 鉄-Ferrozine錯体を形成させます。この錯体を波長560 nmで測定することにより鉄濃度を求めることができます。

測定方法(サンプル前処理)

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  ◯本キットでダイレクトに定量可能な試料

  e.g.)血清、血漿、尿

  キット中の変性剤が鉄をタンパクから解離させ、発色させます。特に前処理は必要ありません。

  ＊EDTAを含む採血管は測定値に影響を与えるので使用しないでください

  ＊蓄尿をサンプルとする場合は、塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2~3になるよう調整してください。

• ◯酸抽出の必要な試料

  e.g.)細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料

  サンプルを低pHにすることでタンパクから鉄を解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。

  • 遊離鉄
  • タンパク結合（配位）鉄（ Protein-Fe²⁺、e.g.トランスフェエリン、フェリチン、メタロチオネイン）
  • その他、配位結合性鉄

  ＊EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください

  ＊有機鉄やヘム鉄などは酸分解を行って下さい。

• ◯マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料

  e.g.)EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機鉄（ -C-Fe-C- 単結合している場合）、環状配位子内包鉄 （Fe-ポルフィリン等）を含む試料

  酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力な鉄キレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。

  （各分解法に基づいて有機物を分解した後、pH2~3に調整し、定容したのちにアッセイ検体としてください）

キット操作方法

1. (1) DIW、標準液、アッセイ検体 40 μllをwell添加
2. (2) RA 200 µlを96 well plateにアプライ
3. (3) 室温で5分間インキュベート
4. (4) 主波長560 nmの吸光度OD₁を測定
5. (5) 発色液 8 μlをwell添加
6. (6) 室温で5分間インキュベート
7. (7) 主波長560 nmの吸光度OD₂を測定
8. (8) 以下の計算式より鉄濃度を求める
   

製品仕様

• • 使用目的 :
  • 鉄(Fe²⁺,Fe³⁺)の測定
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  • → 弊社製品マイクロアッセイ UIBC(不飽和鉄結合能)キットとの併用で、TIBC(総鉄結合能)の測定に応用可能です。

• • 測定試料 :
  • 血清，血漿，尿，唾液，細胞ライセート，組織抽出液，植物抽出液，毛髪試料抽出液，食品抽出液，飲料水，環境水，鉱水など。
• • 測定範囲 :
  • 5 ～1,000 μg/dL
• • 測定波長(主波長) :
  • 560nm
• • 感度のある波長域 :
  • 540～580 nm
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  • 他の波長域をご希望の場合 → メタロアッセイ 鉄 測定 LS（ニトロソPSAP法）

• • 測定回数(1キット） :
  • 200回
• • アッセイ法 :
  • Ferrozine法
• • 特異性 :
  • 生物種を問いません
• • 共存物質の影響 :
  • 抱合型ビリルビン･非抱合型ビリルビン90 mg/dL
    溶血ヘモグロビン70 mg/dL
    ただし、EDTAは影響を与えますので使用しないでください。
• • 対応している検出機器:
  • マイクロプレートリーダー、紫外可視分光光度計、比色計
    ※キットに96ウェルプレートやキュベットなどは含まれておりません。
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  • 生化学自動分析装置をご使用の場合 → メタロアッセイオート 鉄 N

実施例

• 本キットによる管理血清の測定

  

  図1. 鉄濃度が既知である管理血清の測定結果

• 本キットによるブタ肝臓中鉄濃度の測定

  

  図2. ICP-OES法と本キットによるブタ肝臓中鉄濃度測定結果

その他の実施例はこちら

学術情報