メタロアッセイ 鉄 測定 LS（ニトロソPSAP法）

鉄 LS（ニトロソPSAP法）

  • メタロアッセイ鉄測定LS(ニトロソPSAP法)は、生物試料(血清・血漿・尿など)中の鉄(Fe2+,Fe3+)をマイクロプレートリーダー(96ウェル)で迅速に定量することができます。
  • 本アッセイ原理は免疫抗体法ではなく、キレート定量法であるため、検体の生物種に依存しません。
  • 血清、血漿、尿を検体とする場合は前処理不要です。
  • キット同梱の標準試料とブランク試料の２点により校正するため、多点校正は不要です。
  • 毒劇物を含んでいないため、取扱、廃棄時の安全性に優れています。

  • ※ 弊社製品マイクロアッセイ UIBC(不飽和鉄結合能)キットとの併用で、TIBC(総鉄結合能)の測定に応用可能です。

  • ※ 本製品は研究用キットです。診断目的には使用しないでください。

  • 名称
  • 鉄 測定
    （ニトロソPSAP法)
  • 製品コード
  • FE02M
  • 測定対象
  • Fe2+
    Fe3+
  • 対象サンプル
  • 血清・血漿・尿などの生物試料
  • 測定波長
    （極大波長）
  • 740～760 nm (750 nm)
  • 測定範囲
  • 10 ～1,000 μg/dL
  • マニュアル
  • マニュアル
  • MSDS
  • MSDS
  • 測定回数
    （1キット）
  • 200回
  • 価格/円（税別）
  • 38,000

測定意義

鉄は重要な構成元素として多くの酵素中に含まれています。血中の鉄はすべてトランスフェリンと結合しており、ミオグロビン、ヘモグロビ ンなど、鉄を必要としているグロビンタンパク質の合成のため、赤芽球や各組織へ輸送されます。酸素を輸送するタンパク質の生成には鉄は不可欠であり、その欠乏は鉄分欠乏性貧血、慢性出血性貧血、感染性の貧血を引き起こします。また、肝炎、肝硬変などでトランスフェリンの増加、高濃度の鉄が観測されます。再生不良性貧血、悪性貧血なども鉄の増加を示します。

測定原理

本法はNitroso-PSAPと鉄とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し鉄濃度を求めます。

トランスフェリン等の輸送タンパク質に結合している鉄を、試薬中の弱酸、変性剤により解離させ、 鉄-Nitroso-PSAP錯体を形成させます。この錯体を波長 750nm で測定することにより鉄濃度を求めることができます。

原理図FE02M_101

測定方法(サンプル前処理)

前処理プロトコル



  • ◯本キットでダイレクトに定量可能な試料

    e.g.)血清、血漿、尿

    キット中の変性剤が鉄をタンパクから解離させ、還元剤によって還元したのち発色させます。特に前処理は必要ありません。

    ＊EDTAを含む採血管は測定値に影響を与えるので使用しないでください

    ＊蓄尿をサンプルとする場合は、塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2~3になるよう調整してください。

  • ◯酸抽出の必要な試料

    e.g.)細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料

    サンプルを低pHにすることでタンパクから鉄を解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。

    • 遊離鉄
    • タンパク結合（配位）鉄（ Protein-Fe2+、e.g.トランスフェエリン、フェリチン、メタロチオネイン）
    • その他、配位結合性鉄

    ＊EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。

    ＊有機鉄やヘム鉄などは酸分解を行って下さい。

  • ◯マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料

    e.g.)EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機鉄（ -C-Fe-C- 単結合している場合）、環状配位子内包鉄 （Fe-ポルフィリン等）を測定したい試料

    酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力な鉄キレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。

    （各分解法に基づいて有機物を分解した後、pH2~3に調整し、定容したのちにアッセイ検体としてください。）

キット操作方法

  1. (1) DIW、標準液、アッセイ検体 15 μlを96 well plateにアプライ
  2. (2) RA 160 μlをwell添加
  3. (3) 室温で10分間インキュベート
  4. (4) 発色液 75 μlをwell添加
  5. (5) 室温で5分間インキュベート
  6. (6) 主波長750nmの吸光度を測定
  7. (7) 以下の計算式より鉄濃度を求める
    FE02M計算式

製品仕様

    • 使用目的 :
    • 鉄(Fe2+,Fe3+)の測定
    • 測定試料 :
    • 血清，血漿，尿，唾液，細胞ライセート，組織抽出液，植物抽出液，毛髪試料抽出液，食品抽出液，飲料水，環境水，鉱水など
    • 測定波長(主波長) :
    • 750 nm
    • 感度のある波長域 :
    • 740 ～ 760 nm
    • 測定範囲 :
    • 10 ～1,000 μg/dL
    • アッセイ法 :
    • N-PSAP法
    • 特異性 :
    • 生物種を問いません
    • 反応条件 :
    • 室温（25ºC〜37ºC）10分間
    • 保存温度 :
    • 2-8ºC
    • 有効期限 :
    • 製造後12ヶ月
    • 共存物質の影響 :
    • 抱合型ビリルビン･非抱合型ビリルビン30 mg/dL
      乳び500FTU
      ヘモグロビン 0.1 g/dL
      ただし、EDTAは影響を与えますので使用しないでください。
    • 対応している検出機器:
    • マイクロプレートリーダー、紫外可視分光光度計、比色計
      ※キットに96ウェルプレートやキュベットなどは含まれておりません

実施例

  • 本キットによる管理血清の測定

    血清鉄測定例

    図1. 鉄濃度が既知である管理血清の測定結果

  • 本キットによるブタ肝臓中鉄濃度の測定

    ブタ肝臓測定例

    図2. ICP-OES法と本キットによるブタ肝臓中鉄濃度測定結果

その他の実施例はこちら

学術情報

本キット使用文献

弊社発表文献

  • 岩渕拓也：技術情報協会（編）　微量金属分析とその前処理技術,p192-200(2015)
  • 岩渕拓也、鈴木裕子：技術情報協会（編）　最先端バイオマーカーを用いた診断薬/診断装置開発と薬事対応(2015)
  • 鈴木裕子, 大槻　透, 伊藤奈月, 佐藤文平, 小出和弘, 岩渕拓也, 生体鉄研究に適用できるカラーメトリーアッセイと新規なプローブの活用法, 細胞46(1), 2014.
  • その他の文献リストはこちら

本キット参考文献（論文記載用）

  • 斎藤幹彦, 堀口大吉, 喜納兼勇, 分析化学, 30, 635-639(1981)